Liquid AST (SGOT)
Reagent Set
Каталожный № HTI-A7561
Каталожные номера:
HTI-A7561-120
HTI-A7561-600
Назначение
Набор предназначен для количественного
определения аспартатаминотрансферазы (АСТ) в
сыворотке крови.
Клиническое значение
Активность фермента аспартатаминотрансферазы
(АСТ) определяется во многих тканях. Наиболее
высокая активность АСТ обнаружена в ткани печени,
сердца, скелетной мускулатуры и почек. При
повреждении ткани этих органов происходит
повышение в сыворотке крови уровня АСТ. После
инфаркта миокарда уровень АСТ повышается и
достигает пика через 48-60 часов.
При заболеваниях печени и желчного пузыря, таких
как цирроз, метастатическая карцинома, вирусный
гепатит происходит повышение уровня АСТ.
Повышение уровня АСТ происходит и при таких
состояниях как мышечная дистрофия,
дерматомиозиты, острый панкреатит, инфекционный
мононуклеоз.
История метода
Karmen и соавт. в 1955 году разработали
кинетический метод определения активности АСТ с
использованием малатдегидрогеназы и NADH. Henry
и соавт. в 1960 году, Amador и Wacker в 1962 году
модернизировали этот метод. В 1974 году комитет по
ферментам Скандинавского Общества Клинической
Химии и Клинической Физиологии (Scandinavian
Society for Clinical Chemistry and Clinical Physiology)
рекомендовали этот метод в оптимальной
модификации. В 1976 году Международная
Федерация Клинической Химии (IFCC)
рекомендовала использование пиридоксаль-5-
фосфата в реакционной смеси, что позволило
увеличить активность фермента.
Принцип теста
L-аспартат + α-кетоглутарат АСТ Оксалоацетат + L-глутамат
Оксалоацетат + NADH + H+ МД L-малат + NAD+ + H2O
АСТ катализирует перенос аминогрупп с L-аспартата на
α-кетоглутарат с образованием оксалоацетата и L-
глутамата. Оксалоацетат подвергается окислению, при
этом NADH окисляется до NAD. Катализатором реакции
является малатдегидрогеназа. Снижение абсорбции при
340 нм прямо пропорционально активности АСТ в
исследуемом образце. Лактатдегидрогеназа используется
для предупреждения влияния эндогенного пирувата,
который присутствует в сыворотке крови здорового
человека.
Реагенты
После смешивания реагента А и реагента В концентрация
L-аспарагиновой кислоты 200 мМ, α-кетоглутаровой
кислоты 12 мМ, Лактатдегидрогеназы (микробная) > 1000
МЕ/мл, Малатдегидрогеназы (микробная) 800 МЕ/л,
NADH 0,18 мМ, Буфер рН 7,8+0,1, азид натрия 0,01.
Стабилизаторы.
Подготовка реагентов
Смешать 5 объемов реагента R1 и 1 объем реагента R2
(например, 250 мл реагента R1 и 50 мл реагента R2).
Хранение реагентов и стабильность
1. Хранить в холодильнике при 2-80С.
2. Неоткрытый набор можно использовать до
истечения срока годности, который указан на
этикетке набора. Растворенные реагенты стабильны
в течение 2 дней при комнатной температуре (18-
250С) и 14 дней в холодильнике при 2-80С.
Непригодные для анализа реагенты
Не использовать реагент если:
1. Начальная абсорбция рабочего реагента против
воды при 340 нм больше 0,800.
2. Изменились свойства реагента.
Предостережения
1. Только для in vitro диагностики
2. Реагент R1 содержит в качестве консерванта раствор
азида натрия <0.1% (w/v). Азид натрия при контакте с
металлом может образовывать взрывоопасные
соединения. Поэтому при удалении реагентов в
сточные трубы (свинец) необходимо смывать их
большим количеством проточной воды.
Сбор и хранение образцов
1. Использовать только свежие, негемолизированные
образцы сыворотки крови.
Liquid AST (SGOT)
Reagent Set
Каталожный № HTI-A7561
2. Концентрация фермента стабильна в течение 4
дней при комнатной температуре (15-300С), 10
дней в холодильнике при 2-80С и 14 суток в
холодильнике при -200С.
Влияние других соединений
1. У пациентов с тяжелым дефицитом витамина В6
активность АСТ может быть очень низкой,
возможно, из-за недостатка пиридоксальфосфата.
2. Билирубин при концентрации 18 мг/дл, гемоглобин
при концентрации 300 мг/дл, не оказывают
влияние на результаты исследования.
Материалы, входящие в состав набора
Реагенты АСТ (SGOT): реагент R1, реагент R2.
Материалы необходимые, но не
поставляемые
1. Автоматические пипетки.
2. Пробирки
3. Таймер
4. Биохимический анализатор, для измерения
абсорбции при длине волны 340 нм.
5. Термостатируемый блок / водяная баня (370С).
Автоматический метод определения
Wavelength: 340 nm
Assay Type: Kinetic
Sample/Reagent Ratio: 1:11
Reaction Direction: Decreasing
Temperature: 37°C
Lag Time: 60 seconds
Read Time: 60 seconds
Low Normal: 5 U/L
High Normal: 34 U/L
Существуют параметры измерения концентрации
АСТ на других анализаторах. Необходимо
связываться со службой технической поддержки.
Ручной метод определения
1. Приготовить рабочий реагент в соответствии с
инструкцией.
2. Внести по 1,0 мл реагента в каждую пробирку.
Инкубировать в течение 5 минут при 370С.
3. Настроить спектрофотометр на «0» по воде при
340.
4. Внести по 100 мкл исследуемых образцов
сыворотки крови. Перемешать. Инкубировать в
течение 1 минуты при 370С.
5. После инкубации измерить абсорбцию. Прогреть
реакционную смесь до 370С. Повторить измерение 2
раза с интервалом в 1 минуту.
6. Определить изменение абсорбции в минуту (ΔА/мин)
Замечания к проведению процедуры
1. Если используется спектрофотометр с
автоматическим температурным контролем
реакционной кюветы, считывание абсорбции должно
проводиться в отдельной кювете.
2. В мутных и сильно иктеричных образцах начальная
абсорбция может быть очень высокой. Рекомендовано
для анализа использовать 50 мкл образца.
Полученные результаты необходимо умножить на 2.
Ограничения
1. Если в исследуемом образце предполагаемая
концентрация фермента выше, чем 500 МЕ/мл, то
необходимо провести разведение: 1 объем
исследуемой плазмы/сыворотки на 1 объем
изотонического солевого раствора. Полученные
результаты необходимо умножить на 2.
2. У пациентов с тяжелым дефицитом витамина В6
активность АСТ может быть очень низкой, возможно,
из-за недостатка пиридоксальфосфата.
Калибровка
Процедура стандартизована по миллимолярной
абсорбции NADH (6,22 при 340 нм) при стандартных
условиях.
Подсчет результатов
Одна международная единица – это то количество
фермента, которое при определенных условиях
катализирует превращение 1 мкмоль субстрата за 1
минуту.
АСТ(МЕ/л)=(ΔАbs/минХ1,10Х1000)/(6,22Х0,10Х1,0)=
=ΔА/минХ1768
Где:
ΔА/мин – изменение абсорбции в минуту.
1,10 – общий объем реакционной смеси (мл)
1000 – перевод МЕ/мл в МЕ/л.
6,22 – миллимолярная абсорбция NADH
0,10 – объем исследуемого образца, мл.
1,0 – длина светового пути, см.
Пример подсчета:
ΔА/мин = 0.12
тогда, 0,12Х1768=212 МЕ/л
Liquid AST (SGOT)
Reagent Set
Каталожный № HTI-A7561
Внимание: если объемы реакционной смеси
изменены, необходимо сделать пересчет результатов
в соответствии с формулой.
Международные единицы: для перевода в
международные единицы (nkat/l) умножить
концентрацию фермента в МЕ/л на 16,67.
Контроль качества
Рекомендовано при каждом проведении серии
анализов включать коммерческие контрольные
сыворотки (патологические и нормальные) с
известной концентрацией АСТ. Рекомендовано в
каждой лаборатории устанавливать свою частоту
проведения контроля качества.
Концентрация у практически здоровых лиц
АСТ: 8-22 МЕ/л при 300С, до 5-34 МЕ/мл при 370С. В
каждой лаборатории необходимо устанавливать свои
границы нормальных значений.
Характеристики теста
Линейность: 0-500 МЕ/л
Сравнение
Проведен корреляционный анализ результатов,
полученных на данных тест-наборах и другого
коммерческого тест-набора. Коэффициент
корреляции составил 0,999, регрессионный анализ:
у=0,98Х+1,6. (n=125, диапазон концентраций 15-659
МЕ/мл).
Точность
Внутри серии От серии к серии
Среднее S.D. C.V.% Среднее S.D. C.V.%
42 1.2 2.9 43 1.3 3.0
202 1.7 0.8 206 4.0 1.9
408 2.6 0.6 411 4.4 1.1
Чувствительность
Определялась по изменению абсорбции
изотонического солевого раствора при 340 нм и в
образце сыворотки крови с известной концентрацией.
Были проведены серии из 10 исследований.
Результаты показали, что абсорбция в АСТ реагенте
практически не отличается от таковой в нулевом
стандарте. Изменение абсорбции на 0,0004 примерно
эквивалентно активности АСТ 1 МЕ/л.
Произведено High Technology Inc.
109 Production Rd
Walpole, MA 02081 USA
Fax: 1 508 660-22-24
e-mail: Данный адрес e-mail защищен от спам-ботов, Вам необходимо включить Javascript для его просмотра.